参芪益母膏制备工艺优化实验探讨 本文关键词：制备，探讨，优化，实验，工艺
参芪益母膏制备工艺优化实验探讨 本文简介：摘要：目的：优化参芪益母膏制备工艺，确定有效成分提取最佳工艺。方法：利用不同浓度的乙醇进行提取，考察制剂中总黄酮、总皂苷及浸膏得率的提取工艺；采用Ｌ９（３４）正交进行设计，考察用水提取制剂中盐酸益母草碱及浸膏得率的工艺。结果：醇提部分最佳条件是：以７０％乙醇为溶剂，加８倍量乙醇，提取３次，每次１５ｈ
参芪益母膏制备工艺优化实验探讨 本文内容：
摘要：目的：优化参芪益母膏制备工艺，确定有效成分提取最佳工艺。方法：利用不同浓度的乙醇进行提取，考察制剂中总黄酮、总皂苷及浸膏得率的提取工艺；采用Ｌ９（３４）正交进行设计，考察用水提取制剂中盐酸益母草碱及浸膏得率的工艺。结果：醇提部分最佳条件是：以７０％乙醇为溶剂，加８倍量乙醇，提取３次，每次１５ｈ；水提部分最佳条件是：加１２倍量的水浸泡６０ｍｉｎ，煎煮２次，每次１５ｈ；考察活性成分含量较高，浸膏得率高。结论：该提取工艺简单，能保证参芪益母膏中有效成分的含量，质量稳定可控。
关键词：参芪益母膏，正交试验，制备工艺优化
参芪益母膏是广西梧州市中医院的院内制剂，已在临床上使用２０余年，其处方由益母草、黄芪、党参、阿胶、白芍等八味中药组成。为了探索参芪益母膏中各药材有效成分的分离提取，保证产品质量，笔者对其提取工艺进行了研究；根据处方各药活性成分的理化性质不同，将药材分为两部分：一部分用乙醇回流提取皂苷类、多糖类、黄酮类等成分，一部分用水煎煮提取生物碱类、萜类、黄酮类等成分。本研究确定其最佳提取工艺，旨在为保证参芪益母膏中有效成分的含量，质量稳定可控。
１仪器与材料
１.１仪器
ＴＵ⁃１９０１双光束紫外⁃可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；Ｂ３５００Ｓ⁃ＭＴ超声波清洗器（必能信超声（上海）有限公司）；Ａｇｉｌｅｎｔ１２００高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；ＸＳ１０５ＤＵ电子分析天平（美国梅特勒⁃托利多公司）。
１.２材料
芦丁（批号：１０００８０⁃２０１６０８）、黄芪甲苷（批号：１１０７８１⁃２０１６１６）、盐酸益母草碱（批号：１１１８２３⁃２０１７０４）对照品均购自中国食品药品检定研究院；益母草（批号：２０１６０７１３）、黄芪（批号：２０１６０８２８）、党参（批号：２０１６０９２６）、白芍（批号：２０１６０９０３）、鸡血藤（批号：２０１６０７１２）、仙鹤草（批号：２０１６０９０３）、熟地黄（批号：２０１６０６０３）等药材均购自南宁市中药材供应站，经广西中医药大学药学院陆海琳高级实验师鉴定均为药典正品。
２醇提部分工艺优化
２.１总黄酮的含量测定
２.１.１对照品溶液的制备：取芦丁对照品２０ｍｇ，精确称定，置５０ｍＬ量瓶中，加５０％乙醇，定容，摇匀。２.１.２供试品溶液的制备：取处方量药材适量，共９份，按正交试验设计加乙醇，回流提取，过滤，滤液回收乙醇，定容至１００ｍＬ量瓶中，备用。精密量取１ｍＬ，置５０ｍＬ量瓶中，定容，摇匀。２１３测定法：精密量取适量的供试品溶液，置２５ｍＬ量瓶中，加蒸馏水至６ｍＬ，加１ｍＬ５％亚硝酸钠溶液，摇匀，静置６ｍｉｎ，加１ｍＬ１０％硝酸铝溶液，摇匀，再静置６ｍｉｎ，加１０ｍＬ氢氧化钠试液，定容，摇匀，静置１５ｍｉｎ，以相应的试剂为空白，照２０１５年版中国药典（通则０４０１）紫外⁃可见分光光度法，在５１０ｎｍ波长处测定吸光度，计算供试品溶液中总黄酮（以芦丁计）的含量，计算，即得。２２总皂苷的含量测定２２１对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品５ｍｇ，精确称定，置１０ｍＬ量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。２.２.２供试品溶液的制备：称取处方量药材适量，共９份，照正交试验设计，加乙醇回流提取，过滤，回收乙醇，定容至１００ｍＬ量瓶中。精密量取１ｍＬ，置于５０ｍＬ量瓶中，定容，摇匀。精密量取浓缩液１０ｍＬ，用正丁醇溶液（水饱和）振摇提取４次，每次４０ｍＬ；合并正丁醇液，再用氨试液洗涤２次，每次４０ｍＬ，弃掉氨试液，将正丁醇液蒸干，加甲醇溶解，转至１０ｍＬ量瓶中，定容，摇匀。２２３测定法：精密量取适量的供试品溶液，置于１０ｍＬ具塞试管中，挥干溶剂，加入０２ｍＬ新配制５％香草醛⁃冰醋酸，０８ｍＬ高氯酸，摇匀，７０℃水浴加热１５ｍｉｎ，立即冷却５ｍｉｎ，加冰醋酸５ｍＬ，摇匀，照２０１５年版中国药典（通则０４０１）紫外⁃可见分光光度法，在５９０ｎｍ波长处测定吸光度。计算供试品溶液中总皂苷的含量，即得。
２.３浸膏得率的测定
精密量取各样品的乙醇提取液２０ｍＬ，置于已干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，于１０５℃干燥３ｈ，取出，置干燥器中冷却４０ｍｉｎ；精密称定重量，得出浸膏和蒸发皿总重，计算浸膏得率。２４正交试验设计与结果〔１，２〕以总黄酮、总皂苷含量和浸膏得率的综合评分为考察指标，以乙醇浓度（Ａ）、乙醇用量（Ｂ）、提取次数（Ｃ）和提取时间（Ｄ）为考察因素，用Ｌ９（３４）正交进行设计，对提取工艺进行比较、优选，因素与水平见表１。正交试验安排与结果见表２，方差分析见表３。结果表明，醇提工艺正交试验提取效果的影响因素大小顺序为Ａ＞Ｃ＞Ｂ＞Ｄ。乙醇浓度、乙醇用量和提取次数对综合评分有显著影响，结果：Ｐ＜００５，而提取时间的影响不显著。故提取工艺的最终优化方案为Ａ２Ｂ２Ｃ３Ｄ２，即称取药材适量，加８倍量７０％乙醇，回流提取３次，每次提取１５ｈ。２５验证试验据优选的工艺研究，提取３批药材样品，进行验证试验，结果见表４。从提取结果分析可得，验证试验测定的结果与已优选的醇提条件相符，说明正交试验选出的提取工艺条件较好，条件稳定，重现性较好。
３水提部分工艺优化
３.１浸泡时间考察
在药物制备提取过程中，浸泡时间也会一定程度影响其他因素，从而可能影响待测物主要成分的提取率等，故选择浸泡时间这一单因素作为考察，通过计算药材在不同浸泡时间的吸水率，来确定其最佳浸泡时间，而进行优选。结果表明，药材在浸泡６０ｍｉｎ之后，吸水量几乎无变化，可见药材在浸泡６０ｍｉｎ时吸水量基本已经达到平衡。从生产实际出发，同时为让药材充分浸泡，故选择药材的最佳浸泡时间为６０ｍｉｎ。
３.２盐酸益母草碱的含量测定
３.２.１色谱条件及其系统适用性试验：色谱柱为ＸｔｉｍａｔｅＴＭＣ１８（２５０ｍｍ×４６ｍｍ，５μｍ）；流动相为乙腈⁃００１％磷酸溶液（１５∶８５）；检测波长为２８０ｎｍ；柱温为２５℃；流速为１０ｍＬ／ｍｉｎ。３２２对照品溶液的制备：精密称取盐酸益母草碱对照品适量，加甲醇，制成每１ｍＬ含３５μｇ的对照品溶液，摇匀。３.２.３供试品溶液的制备：精密量取正交试验的浓缩液２０ｍＬ，置于１５０ｍＬ具塞锥形瓶中，加７０％乙醇５０ｍＬ，精密称定重量。回流提取２ｈ，冷至室温，称定重量，如有减失的重量，用７０％乙醇液补足，过滤，取续滤液各１ｍＬ置塑料离心管中，离心（５０００ｒ／ｍｉｎ，１０ｍｉｎ），微孔滤膜（０２２μｍ）过滤，备用。３.２.４测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各１０μＬ，注入液相色谱仪测定，记录色谱图情况，即得。３３浸膏得率测定照２０１５年版中国药典，精密量取浓缩液２５ｍＬ，置干燥至恒重的蒸发皿（Ｗ１）中，水浴蒸干，１０５℃干燥３ｈ，置干燥器中冷却４０ｍｉｎ，精密称定重量，得出浸膏和蒸发皿总重（Ｗ２），计算浸膏得率。
３.４正交试验结果〔３⁃５〕
取处方量的３味药材适量，共９份，加水浸泡６０ｍｉｎ后，照正交试验设计表，进行煎煮，合并煎液，过滤，浓缩，再转移至２５０ｍＬ量瓶中，定容，摇匀。以盐酸益母草碱含量和浸膏得率的综合评分为考察指标，考察因素为加水量（Ａ）、提取时间（Ｂ）和提取次数（Ｃ），因素与水平见表５，正交试验安排与结果见表６，方差分析见表7.较好的重现性。
４小结
根据上述试验，醇提工艺的最佳提取方案为以７０％乙醇为溶剂，加８倍量乙醇，回流提取３次，每次１５ｈ。水提工艺的最佳提取方案为以水为溶剂，加水１２倍量，提取３次，每次２ｈ。用正交试验筛选了参芪益母膏提取工艺，因素具显著影响，正交意义明显；所确定的提取工艺中醇提和水提的提取率高，工艺稳定可行，重现性较好，可为生产实践提供实验依据。本文采用高速离心法进行纯化除杂，该法可在常温下操作，在一定程度上提高了活性成分的保留率，使得活性组分的生物、物理和化学等性质的稳定；同时操作比较简单、分析时间短、消耗的能源材料比较少，从而达到生产成本降低等优点。
参考文献
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［５］李启泉，赵福兰，余小飞，等正交试验法优选青诃袋泡茶水提取工艺［Ｊ］．中国药业，２０１５，２４（２１）：７４⁃７６
作者：黄艳红 梁芳 龚志强 梁臣艳 梁杰豪 单位：广西中医药大学赛恩斯新医药学院 广西中医药大学
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