石油降解菌的筛选和鉴定研究 本文关键词：降解，筛选，鉴定，石油，研究
石油降解菌的筛选和鉴定研究 本文简介：摘要:从大庆油井旁含油土壤中筛选出两株石油降解菌，经过形态观察和生理生化鉴定，最后16SrDNA鉴定。结果表明:C3J1-2为微小杆菌属(Exiguobacterium)、A3J1-1为不动杆菌属(Acinetobacter)。关键词:石油降解菌;筛选;鉴定石油在开采和运输过程中会发生储油罐泄漏、井
石油降解菌的筛选和鉴定研究 本文内容：
摘要:从大庆油井旁含油土壤中筛选出两株石油降解菌，经过形态观察和生理生化鉴定，最后16SrDNA鉴定。结果表明:C3J1-2为微小杆菌属(Exiguobacterium)、A3J1-1为不动杆菌属(Acinetobacter)。
关键词:石油降解菌;筛选;鉴定
石油在开采和运输过程中会发生储油罐泄漏、井喷、输油管道破裂等事故，或是含油废水排放、有害废泥浆排放等不良行为，导致大量石油及其产品污染土壤、破坏植被，严重威胁着生态系统的平衡和安全。［1］探索高效、经济的处理方法修复石油污染土壤，对于生态环境具重要意义。［2］生物修复技术具有环境友好、成本低廉、操作简便、对操作人员危害小、作用彻底等特点，越来越引起人们的重视，被广泛应用到环境污染治理领域。［3］本人从油井附近油污土壤中筛选出三株石油降解菌，经过鉴定其中C3J1-2为微小杆菌属(Exiguobacterium)、E1J4-1和A3J1-1为不动杆菌属(Acinetobacter)。前人关于微小杆菌属(Exiguobacterium)降解石油烃的论文较少。
1实验方法
1．1筛选参照董丁［4］论文配置培养基《微生物学实验》［5］配置所需培养基，取2g从大庆油井附近采集的油污土，使用前一直置于-80℃环境。将土壤置于含油10%的100ml无机盐培养基中，并加入几颗玻璃珠，在160rpm、30℃条件下摇床震荡培养5d后，取10ml培养液转移转移到新的含油无机盐培养基中，160rpm、37℃条件继续摇床震荡培养5d，连续驯化传代5次。取100μL培养液涂布于油平板上，置于37℃培养16h，挑取不同形态和颜色的单菌接种于含油培养基中，连续划线培养3次，直至镜检无杂菌，得到纯化菌株。分离出的菌株转接到石油固体培养基并生长良好，则认为该菌具有潜在的降解石油烃特性，即为待筛菌株。1．2鉴定观察三株细菌的菌落形态边缘、颜色和透明度等并做好记录，其次参照《微生物学实验》［6-7］进行细菌生理生化试验，最后依据《常见细菌系统鉴定手册》［8］和《伯杰氏细菌鉴定手册》［9］对细菌进行鉴定。1．316SrDNA鉴定参照王立秀［10］研究，利用提取的细菌基因组DNA模板，使用通用引物27F(5"-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3")和1492Ｒ(5"-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3")对筛选出的石油降解菌的16SrDNA基因进行扩增。
2分析
2．1石油降解菌特征通过观察得出:菌株C3J1-2菌落呈圆形、浅黄色、菌落正反面颜色差别不大、有异味、菌落中部凸起、表明光滑、湿润、有光泽、菌落不透明、边缘不整齐;菌株A3J1-1菌落呈圆形、乳白色、菌落正反面颜色差别不大、无异味、菌落中部凸起、表明光滑、湿润、有光泽、菌落不透明、边缘整齐。2．2生理生化实验结果菌株C3J1-2的革兰氏染色为阳性，接触酶试验阳性，氧化酶阴性，V-P实验阴性，好氧性为阳，硝酸盐为阳，甲基红试验为阴，明胶水解为阳，淀粉水解为阳，油脂水解为阴，石蕊牛奶试验为阴，吲哚试验为阳，葡萄糖发酵不产气;菌株A3J1-1革兰氏染色为阴性，接触酶试验阳性，氧化酶阴性，V-P实验阴性，好氧性为阳，硝酸盐为阴，甲基红试验为阴，明胶水解为阴，淀粉水解为阳，油脂水解阳，石蕊牛奶试验为阳，吲哚试验为阳，葡萄糖发酵不产气。2．316SrDNA鉴定将测得的16SrDNA序列提交至GenBank，下载同源性达97%以上的序列，用MEGA软件构建系统进化树。最终得出，鉴定C3J1-2为微小杆菌属(Exiguobacterium)、E1J4-1和A3J1-1均为不动杆菌属(Acinetobacter)。
3结论展望
最终得出，鉴定C3J1-2为微小杆菌属(Exiguobacterium)、E1J4-1和A3J1-1均为不动杆菌属(Acinetobacter)。本研究丰富了石油烃降解菌的研究，为石油污染的微生物修复提供了菌种资源和相关信息。可以深入进一步研究细菌的具体降解效果，未更好发挥细菌作用提供参考。
参考文献:
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［6］程丽娟，薛泉宏．微生物学实验［M］．北京:科学出版社，2012．
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［9］Ｒ．E布坎南，N．E．吉本斯，等．伯杰细菌鉴定手册(第八版)［M］．北京:科学出版社，1984．
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作者：程进 单位：哈尔滨师范大学地理科学学院
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